關鍵字：AP試劑盒ELISA
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免疫組化操作步驟
(酶聯免疫吸附試驗：AP試劑盒ELISA
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
↓ 加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔 中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
↓ 于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標**抗體（抗抗體）0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,*后一遍用DDW洗滌。
↓ 其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
試劑器材 AP試劑盒ELISA
1. 試劑 （1） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
（2） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
（3） 稀釋液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使
（4） 終止液（2M H2SO4）： 蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。
（5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。
（6） TMB（四甲基聯苯胺）使用液: TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5） 10ml 0.75％H2O2 32μl
（7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl
（8） 抗原、抗體和酶標記抗體。
（9） 正常人血清和陽性對照血清。
2. 器材:
（1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
（2） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。AP試劑盒ELISA
影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點、Elisa試劑盒測定技術的發展 臨床測定技術的發展主要在于方法學的發展，
而方法學的發展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前，分子生物學正在并*終肯定會讓我們對整個生命科學有一個**而徹底的認識，
其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
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